南京医科大学学报(自然科学版)

作者：胡平平,朱传龙,徐瑞瑞,田安然,李 军

单位：南京医科大学第一附属医院感染病科，江苏 南京 210029,,南京医科大学第一附属医院感染病科，江苏 南京 210029,,南京医科大学第一附属医院感染病科，江苏 南京 210029,,南京医科大学第一附属医院感染病科，江苏 南京 210029,,南京医科大学第一附属医院感染病科，江苏 南京 210029,

关键词：乙型肝炎病毒;丙型肝炎病毒;钠离子牛磺胆酸共转运蛋白;Huh7.5.1细胞

基金：国家自然科学基金（81770591，81871242）；江苏省医学创新团队（CXTDA2017023）

目的：利用慢病毒载体在可感染丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）的Huh7.5.1细胞中过表达人肝细胞乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）受体钠离子牛磺胆酸共转运蛋白（sodium taurocholate cotransporting polypeptide，NTCP）编码基因，建立Huh7.5.1-hNTCP细胞模型，使其可以被HBV、HCV共同感染。方法：使用携带人NTCP编码基因、绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）基因、嘌呤霉素抗性基因的GV358重组慢病毒载体，以感染复数（MOI）50感染Huh7.5.1细胞。经过嘌呤霉素筛选获得稳定表达人NTCP基因的Huh7.5.1-hNTCP细胞株，并通过Western blot验证NTCP蛋白的表达。使用HepAD38细胞来源的HBV感染Huh7.5.1-hNTCP细胞，通过ELISA及qPCR等方法检测HBV感染后不同时间点乙肝病毒表面抗原（HBsAg）、e抗原（HBeAg）的表达以及HBV DNA的复制。HBV感染后24 h予以HCV-JFH1感染，检测合并感染状态下HBV DNA以及HCV RNA的复制。结果：Western blot结果表明Huh7.5.1-hNTCP细胞株可稳定表达HBV受体NTCP。HBV感染Huh7.5.1-hNTCP细胞后ELISA、qPCR结果显示，HBsAg、HBeAg、HBV DNA合成逐渐增加，并在第9天达峰。HBV/HCV合并感染Huh7.5.1-hNTCP细胞后，qPCR检测结果显示不同时间点HBV DNA、HCV RNA复制逐渐增加。结论：建立了Huh7.5.1-hNTCP细胞模型，该模型可被HBV/HCV合并感染。

来源：2019年第1期

《南京医科大学学报(自然科学版)》期刊编辑部

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