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国内刊号：32-1442/R
国际刊号：1007-4368
发布日期:
作者：徐 帜,孙文博,张妍妍,许 勇,唐金海
单位：南京医科大学第一临床医学院，江苏 南京 210029,,南京医科大学附属肿瘤医院，江苏 南京 210009,,南京医科大学附属肿瘤医院，江苏 南京 210009,,南京医科大学附属肿瘤医院，江苏 南京 210009,,南京医科大学第一临床医学院，江苏 南京 210029,
关键词：RelB;CRISPR/cas9;基因敲除;C57BL/6小鼠
基金：国家自然科学基金（81872365）；国家重点研发计划（2016YFC0905900）
目的：利用CRISP/Cas9技术敲除C57BL/6小鼠中的RelB基因，为核因子（nuclear factor，NF）-κB转录因子蛋白家族的RelB基因与肿瘤转移等方面的研究提供RelB基因敲除实验动物模型。方法：利用基因编辑技术CRISPR/Cas9系统，设计并构建针对目的基因RelB第4外显子sgRNA，同时利用T7 RNA聚合酶体外转录Cas9 mRNA。取C57BL/6小鼠受精卵体外注射sgRNA和Cas9 mRNA后，进行胚胎移植，实现靶基因敲除。待小鼠出生后提取DNA并进行PCR鉴定，获得F0代，后与野生型交配后繁殖，取样提取DNA，测序分析鉴定后获得F1代小鼠，并在蛋白质水平和基因组水平分别验证敲除效果。结果：获得了4个在RelB基因突变的首建鼠，并得到了稳定遗传的RelB基因敲除小鼠。基因组测序结果示，敲除实验组中RelB的mRNA出现无义突变，令其mRNA翻译终止。与对照组相比，敲除实验组检测不到RelB蛋白表达。同时，Western blot结果显示，NF-κB家族中其他成员RelA、p50和p52的蛋白表达不受影响。结论：成功获得特异性敲除RelB的C57BL/6小鼠，为RelB在肿瘤转移、耐药中的研究提供了重要工具。
来源：2019年第3期
《南京医科大学学报(自然科学版)》期刊编辑部
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