南京医科大学学报(自然科学版)

作者：童朝刚,朱月琴,王亚男,潘学胜,芮晨辉,黄 艳

单位：安徽医科大学附属巢湖医院普外科，安徽 合肥 238000,,安徽医科大学药学院，安徽 合肥 230032,,安徽医科大学药学院，安徽 合肥 230032,,安徽医科大学药学院，安徽 合肥 230032,,安徽医科大学药学院，安徽 合肥 230032,,安徽医科大学药学院，安徽 合肥 230032,

关键词：血小板衍生生长因子BB;微小RNA;肝星状细胞;高通量测序

基金：安徽省自然科学基金杰青项目（1908085J30）；安徽省高校自然科学研究项目（KJ2017A192）；安徽省学术技术带头人后备人选科研活动经费资助项目（2015H040）；高校优秀青年人才支持计划重点项目（gxyqZD2016049）；安徽医科大学国家级大学生创新创业训练计划项目（201810366060）；安徽医科大学校级青年拔尖人才支持计划（0601037104）；青年英才双培工程（0601037206）；临床医学(“5+3”一体化)专业“早期接触科研”训练计划立项制项目（2017?ZQK

目的：探讨酸敏感离子通道1a（acid-sensing ion channel 1a，ASIC1a）特异性阻断剂狼蛛毒素（psalmotoxin-1，PcTx-1）抑制血小板衍生生长因子BB（platelet derived growth factor-BB，PDGF-BB）活化的肝星状细胞（hepatic stellate cell，HSC）过程中微小RNA（microRNA，miRNA）差异表达谱及生物信息学分析。方法：取对数生长期的HSC细胞，分为对照组、模型组和PcTx组。对照组不做处理，模型组加入PDGF-BB（10 ng/mL）培养24 h，PcTx组给予PcTx-1刺激1 h后，再加入PDGF-BB（10 ng/mL）培养24 h。采用RT-PCR和Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）、Ⅰ型胶原（collagen-Ⅰ）和ASIC1a的表达，MTT法检测细胞增殖情况，验证HSC细胞是否活化以及PcTx-1是否阻断ASIC1a的表达。提取的总RNA质检合格后进行高通量测序，筛选差异表达的miRNA。通过miRanda算法对差异miRNA进行靶基因预测，并对miRNA靶基因进行功能和代谢通路分析。结果：PcTx-1阻断ASIC1a后，ASIC1a的表达降低，HSC细胞活化的标志性基因α-SMA和collagen-Ⅰ的表达明显减少，提示PcTx-1可阻断PDGF诱导的HSC活化。与对照组比较，模型组miRNA表达谱中差异表达miRNA共有38个，其中上调6个，下调32个（P < 0.05）。与模型组比较，PcTx组miRNA表达谱中差异表达miRNA共有17个，其中上调1个，下调16个（P < 0.05）。结论：高通量筛选得到的PcTx-1抑制PDGF-BB活化HSC过程中miRNA差异表达谱，为肝纤维化的发病机制研究提供了新的靶点和思路。

来源：2019年第4期

《南京医科大学学报(自然科学版)》期刊编辑部

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