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国内刊号：32-1442/R
国际刊号：1007-4368
发布日期:
作者：乔春敏,乔笑芹,周国平
单位：南京医科大学第一附属医院儿科，江苏 南京 210029,,南京医科大学第一附属医院儿科，江苏 南京 210029,,南京医科大学第一附属医院儿科，江苏 南京 210029,
关键词：脂肪非典型钙黏蛋白1;启动子;转录调控
基金：江苏省“科教强卫”工程创新团队（领军人才）项目（CXTDA2017018）
目的：克隆人脂肪非典型钙黏蛋白1（FAT atypical cadherin 1，FAT1）基因启动子，找到核心启动子区域并对其转录调控机制进行初步分析。方法：通过PCR方法获得人FAT1基因5′上游1 163 bp（-1 029~+134 bp）的片段，亚克隆至pGL3-basic载体；通过步移缺失构建不同缺失片段的重组质粒。双荧光素酶报告活性分析检测各重组质粒在A549细胞和HEK293T细胞中的活性，找到核心启动子区域。利用生物信息学方法预测核心区域的转录因子结合位点。结果：经测序、酶切鉴定，成功构建了人FAT1启动子荧光素酶活性报告基因重组质粒。与pGL3-basic质粒相比，人FAT1启动子重组质粒的相对荧光素酶活性增加（P < 0.05）。通过生物信息学软件预测人FAT1启动子区域（-233~-110 bp）可能含有TFAP2C、KLF5等转录因子结合位点。结论：成功构建人FAT1启动子不同缺失片段的荧光素酶报告基因重组质粒。通过荧光素酶活性比较，推测人FAT1的核心启动子区域位于-233~+134 bp区域，其中可能含有若干转录因子结合位点。
来源：2019年第6期
《南京医科大学学报(自然科学版)》期刊编辑部
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