南京医科大学学报(自然科学版)

作者：陈海燕,徐妍妍,周国平,徐华国

单位：南京医科大学第一附属医院检验学部，江苏 南京 210029,,南京医科大学第一附属医院儿科，江苏 南京 210029,,南京医科大学第一附属医院儿科，江苏 南京 210029,,南京医科大学第一附属医院检验学部，江苏 南京 210029,

关键词：环鸟苷酸⁃腺苷酸合成酶;启动子;转录调控

基金：江苏省自然科学基金面上项目（SBK 2018022334）；江苏省研究生科研创新项目（KYCX17_1287）

目的：构建人环鸟苷酸-腺苷酸合成酶（cyclic guanosine monophosphate-adenosine monophosphate synthase，cGAS）基因启动子，确认其活性，进而对转录调控机制进行初步探究。方法：采用 PCR 方法扩增人cGAS 基因 5′上游 1 254 bp（-1 178~+76 bp）的片段，酶切后连接到pGL3-basic 质粒，以该质粒为模板合成不同长度的启动子质粒。通过双荧光素酶报告基因实验验证不同质粒在Hela细胞中的活性，利用生物信息学方法预测启动子区存在的转录因子结合位点。通过点突变实验验证潜在的转录因子结合位点。结果：人cGAS启动子质粒初步构建成功。转染后，cGAS 启动子重组质粒的相对荧光素酶活性增加（P＜0.05）。人cGAS近端启动子区域（-414~+76 bp）经生物信息学软件分析可能含有 Sp1、CREB、USF1、RAP1、C-JUN、OCT-1等转录因子的结合位点。点突变实验证实Sp1、CREB正向调控该启动子区域。结论：人cGAS近端启动子区域（-414~+76 bp）存在较强的启动子活性，该区域含有多个潜在的转录因子结合位点。转录因子Sp1、CREB调控人cGAS启动子区。

来源：2019年第6期

《南京医科大学学报(自然科学版)》期刊编辑部

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