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国内刊号：32-1442/R
国际刊号：1007-4368
发布日期:
作者：陈天宇,陈 欣,张恒璐,李 婉,陆卫平
单位：南京医科大学附属淮安第一医院内分泌科，江苏 淮安 223300,,南京医科大学附属淮安第一医院内分泌科，江苏 淮安 223300,,南京医科大学附属淮安第一医院内分泌科，江苏 淮安 223300,,南京医科大学病原生物学系，江苏 南京 211166,,南京医科大学附属淮安第一医院内分泌科，江苏 淮安 223300,
关键词：脂肪与肥胖相关基因;小鼠肾小球系膜细胞;m6A;增殖
基金：江苏省卫生健康委员会课题（H201458）；淮安市533英才工程科研项目（HAA201744）
目的：构建表达脂肪与肥胖相关（fat mass and obesity associated，FTO）基因的重组质粒，并检测其对小鼠肾小球系膜细胞（mice mesangial cell，MMC）N6-甲基腺嘌呤（m6A）修饰及增殖能力的影响。方法：PCR法扩增FTO基因片段，并将其插入表达载体 pCMV-MCS-EGFP质粒中以构建重组质粒pCMV-FTO。将目的质粒pCMV-FTO及对照质粒pCMV分别转染MMC，采用qRT-PCR法检测FTO mRNA表达水平，蛋白质印迹法检测细胞FTO蛋白和相关增殖标志物的表达，CCK8法检测细胞增殖，m6A RNA甲基化定量试剂盒检测m6A含量。结果：菌落PCR鉴定以及测序结果证实重组质粒pCMV-FTO构建成功。RT-qPCR及蛋白印迹结果显示转染目的质粒pCMV-FTO后FTO表达明显增加。过表达FTO后，m6A含量、细胞增殖水平及细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）蛋白水平均显著下降。结论：FTO可以降低 MMC中m6A修饰水平及抑制细胞增殖。
来源：2019年第6期
《南京医科大学学报(自然科学版)》期刊编辑部
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