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国内刊号：32-1442/R
国际刊号：1007-4368
发布日期:
作者：朱贤慧,张 蕾,杜紫薇,徐 楚,孙 楠,周亚萍,张 宇,周其冈
单位：南京医科大学药学院，江苏 南京 211166,,南京医科大学药学院，江苏 南京 211166,,南京医科大学药学院，江苏 南京 211166,,南京医科大学药学院，江苏 南京 211166,,南京医科大学药学院，江苏 南京 211166,,南京医科大学药学院，江苏 南京 211166,,南京医科大学药学院，江苏 南京 211166,,南京医科大学药学院，江苏 南京 211166,
关键词：神经元型一氧化氮合酶;慢病毒;神经干细胞;一氧化氮
基金：国家自然基金面上项目（81871065）；江苏省自然科学基金（BK20140905）
目的：构建编码大鼠神经元型一氧化氮合酶（neuronal nitric oxide synthase，nNOS）全长基因的慢病毒载体，并检测其表达效率和催化活性功能。方法：采用RT-PCR提取nNOS的cDNA，同时改造真核表达载体pCDH-GFP。鉴定nNOS的cDNA碱基序列正确后，将目的基因克隆入慢病毒载体pCDH-GFP，得重组载体pCDH-GFP/nNOS，采用Lipofectamine 2000将其及慢病毒包装辅助质粒转染293T细胞，超速离心纯化后，感染神经干细胞和海马齿状回神经元进行感染能力鉴定，并检测nNOS蛋白表达和催化功能。结果：成功构建编码nNOS全长cDNA，测序证明重组慢病毒载体pCDH-GFP/nNOS构建成功。包装慢病毒颗粒LV-nNOS-GFP可以感染离体神经干细胞和在体神经元。Western blot检测证明nNOS蛋白成功表达。一氧化氮浓度检测表明表达的nNOS具有催化活性。结论：慢病毒载体LV-nNOS-GFP构建成功，可以表达功能性全长nNOS蛋白。
来源：2019年第6期
《南京医科大学学报(自然科学版)》期刊编辑部
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