南京医科大学学报(自然科学版)

作者：Samjhana Pandey,钱宝梅,王文博,赵 聃,王迎伟,邱 文

单位：南京医科大学基础医学院免疫学系，江苏 南京 211166,,南京医科大学基础医学院免疫学系，江苏 南京 211166,,南京医科大学基础医学院免疫学系，江苏 南京 211166,,南京医科大学基础医学院免疫学系，江苏 南京 211166,,南京医科大学基础医学院免疫学系，江苏 南京 211166,,南京医科大学基础医学院免疫学系，江苏 南京 211166,

关键词：程序性死亡配体1（PD⁃L1）;信号转导与转录激活因子3（STAT3）;启动子;转录调控

基金：国家自然科学基金（31470853）；南京医科大学优秀中青年教师支持计划

目的：检查信号转导与转录激活因子3（signal transducer and activator of transcription 3，STAT3）对人胶质瘤细胞程序性死亡配体1（programmed death-ligand 1，PD-L1）基因转录和表达的影响，同时筛选PD-L1基因启动区可能的STAT3结合元件。方法：培养U251细胞，给予STAT3抑制剂（BP-1-102）或DMSO处理，9 h后用流式细胞术检查细胞表面PD-L1蛋白的表达情况。将PD-L1基因启动子全长荧光素酶报告质粒（pGL3-PD-L1-FL）转染U251细胞，再给予BP-1-102或DMSO处理，9 h后检查细胞内荧光素酶活性。将PD-L1基因启动子全长和各截短（pGL3-PD-L1-1~4）荧光素酶报告质粒和STAT3过表达质粒（pCMV-STAT3）共转染HEK293细胞，再测定荧光素酶活性，初步确定STAT3的结合区域。应用生物信息学软件预测PD-L1基因启动子上STAT3的结合元件，并开展结合元件突变实验确定有效性。结果：BP-1-102可明显下调U251细胞中PD-L1的基因转录和蛋白表达。此外，将pGL3-PD-L1-FL、pGL3-PD-L1-1~4和pCMV-STAT3共转染HEK293细胞后，pGL3-PD-L1-4的启动活性显著低于其他质粒，提示STAT3可能结合于PD-L1基因启动子-200~0 nt区域。生物信息学软件预测发现，此区域含有2个STAT3的结合元件，分别位于-194~-184 nt和-135~-125 nt部位。进一步研究揭示突变-194~-184 nt和-135~-125 nt元件均可显著下调pGL3-PD-L1-FL的荧光素酶活性，联合突变更为明显。结论：本研究成功筛查出STAT3在人PD-L1基因启动子上的可能结合区域，为后续研究胶质瘤细胞中STAT3相关的PD-L1基因转录调控奠定了基础。

来源：2019年第9期

《南京医科大学学报(自然科学版)》期刊编辑部

查看南京医科大学学报(自然科学版)杂志2019年第9期