南京医科大学学报(自然科学版)

作者：李 冰,杨婷婷,唐 奇,冯振卿,杨永林,陈 宇

单位：南京医科大学第一附属医院麻醉科，江苏 南京 210029,,南京医科大学国家卫健委抗体技术重点实验室，江苏 南京 211166,,南京医科大学国家卫健委抗体技术重点实验室，江苏 南京 211166,,南京医科大学国家卫健委抗体技术重点实验室，江苏 南京 211166,,南京医科大学国家卫健委抗体技术重点实验室，江苏 南京 211166;南京医科大学附属南京医院感染性疾病科，江苏 南京 210006,,南京医科大学第一附属医院麻醉科，江苏 南京 210029,

关键词：HEV;人鼠嵌合基因工程抗体;单克隆抗体

基金：中国博士后科学基金（1851）；南京市医学科技发展项目（ZKX15051）

目的：制备抗戊型肝炎病毒（hepatitis E virus，HEV）的人鼠嵌合基因工程抗体并研究其中和保护作用及特性。方法：将已获得的抗HEV鼠源单克隆抗体基因序列进行优化，设计人鼠嵌合的工程化抗体基因序列，将其克隆入真核表达载体；表达载体共转染293F细胞进行表达优化，高效制备基因工程化抗体；通过酶联免疫反应（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）、免疫荧光及HEV细胞感染模型，研究工程化抗体的结合能力及中和活性。结果：成功构建基因工程化人鼠嵌合HEV保护性抗体表达载体，在293F表达系统中实现高效表达。抗体表达产率达30 mg/L，亲和力为1.202×10-8 mol/L。免疫荧光检测结果显示抗体能够灵敏、特异地与已感染HEV的 Kernow细胞结合，实时荧光定量PCR检测结果显示抗体可保护易感的C3A细胞不被HEV感染。结论：基因工程化抗体抗体具有高效的HEV结合能力及中和作用，能有效阻断HEV感染，并实现低成本高效表达。

来源：2020年第3期

《南京医科大学学报(自然科学版)》期刊编辑部

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