南京医科大学学报(自然科学版)

作者：龚丹丹,高梦云,冯 恬,王怡雯,周婷婷,王一荃,吴立英,朱 进,张慧林,童 华

单位：南京医科大学附属妇产医院妇科，江苏 南京 210004,,南京医科大学附属妇产医院妇科，江苏 南京 210004,,南京医科大学附属妇产医院妇科，江苏 南京 210004,,东部战区疾病预防控制中心，江苏 南京 210002,,东部战区疾病预防控制中心，江苏 南京 210002,,上海中医药大学附属龙华医院内科，上海 200032,,南京医科大学附属妇产医院妇科，江苏 南京 210004,,东部战区疾病预防控制中心，江苏 南京 210002,,南京医科大学附属妇产医院妇科，江苏 南京 210004,,南京医科大学附属妇产医院妇科，江苏 南京 210004,

关键词：ROR1;IgG1;卵巢癌;东亚钳蝎镇痛抗肿瘤多肽

基金：江苏省重点研发计划专项（BE2018613）；江苏省科教强卫工程青苗人才（QNRC2016104）

目的：制备酪氨酸激酶样孤儿受体1（tyrosine-kinase-like orphan receptor1，ROR1）的全分子抗体（ROR1-IgG1）及其与东亚钳蝎镇痛抗肿瘤多肽的融合蛋白的全分子抗体（fusion protein of ROR1 and Buthus martensii Karsch analgesic anti-tumor polypeptide IgG1，IgG1-AGAP），检测ROR1-IgG1和IgG1-AGAP对卵巢癌细胞生物学特性的影响，探讨ROR1在卵巢癌中的作用机制。方法：以本实验室筛选并保存的ROR1Fab载体为模板，构建ROR1-IgG1和IgG1-AGAP真核表达载体，并转染中国仓鼠卵巢细胞（CHO-S），收集上清并纯化。利用酶联免疫吸附实验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）、Biacore X100、免疫荧光、流式细胞术（fluorescence-activated cell sorting，FACS）等评估IgG1-AGAP和 ROR1- IgG1的免疫学活性。通过CCK-8法、划痕实验、Transwell侵袭实验等比较两者对卵巢癌细胞HO8910生物学特性的影响。用蛋白质印迹法（Western blot）检测上皮细胞-间充质转化（epithelial mesenchymal transition，EMT）相关标志物的表达，评估ROR1-IgG1和IgG1-AGAP对卵巢癌细胞迁移和侵袭能力的影响。结果：成功制备出ROR1-IgG1和IgG1-AGAP，且能够与ROR1蛋白特异性结合；IgG1-AGAP与ROR1-IgG1均可抑制ROR1阳性卵巢癌细胞HO8910的增殖、迁移、侵袭，且IgG1-AGAP组的抑制作用显著高于ROR1-IgG1组，而未观察到对ROR1阴性人正常卵巢上皮细胞IOSE386的抑制作用。Western blot结果表明，在空白对照组、ROR1-IgG1组和IgG1-AGAP组中，Snail的表达量呈现递减趋势，而E-cadherin表达量递增，提示 ROR1-IgG1和IgG1-AGAP可通过调控 Snail和E-cadherin而抑制HO8910细胞发生 EMT，进而抑制其迁移和侵袭能力。结论：IgG1-AGAP可有效靶向表达ROR1的卵巢癌细胞，并具有显著的抗肿瘤活性，IgG1-AGAP可作为ROR1阳性肿瘤患者的潜在候选药物。

来源：2020年第3期

《南京医科大学学报(自然科学版)》期刊编辑部

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