南京医科大学学报(自然科学版)

作者：石毓雯，王 星，张玲玉，胡启桢，秦 瑶，高 威，张 梅

单位：南京医科大学第一附属医院内分泌科，江苏 南京 210029,,南通市第一人民医院内分泌科，江苏 南通 226001,,南京医科大学第一附属医院内分泌科，江苏 南京 210029,,南京医科大学第一附属医院内分泌科，江苏 南京 210029,,南京医科大学第一附属医院内分泌科，江苏 南京 210029,,南京医科大学细胞生物学系，江苏 南京 211166,,南京医科大学第一附属医院内分泌科，江苏 南京 210029,

关键词：锌转运体8;嵌合抗原受体;1型糖尿病;抗原特异性;调节性T细胞

基金：国家自然科学基金（81370939，81670756，81974103）；江苏省“333高层次人才培养工程”（LGY2016007）；江苏省重点研发项目（BE2018748）

目的：构建人锌转运体8（zinc transporter 8，ZnT8）嵌合抗原受体（chimeric antigen receptor，CAR）的慢病毒表达载体，为研究抗原特异性调节性T细胞（regulatory T cells，Tregs）在1型糖尿病（type 1 diabetes mellitus，T1DM）自身免疫中的调节作用提供实验基础。方法：通过分子克隆及基因重组技术构建PLVX-EGFP-ZnT8 scfv慢病毒表达载体质粒，并制备ZnT8 scfv-CAR慢病毒；利用ZnT8 scfv-CAR慢病毒感染Tregs，流式细胞术检测绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）的表达确定慢病毒感染效率；细胞计数评估Tregs细胞增殖能力；流式细胞术检测增殖细胞中CD4、CD25、Foxp3和Helios的表达。结果：酶切鉴定和基因测序结果显示PLVX-EGFP-ZnT8 scfv慢病毒表达载体构建成功；质粒共转染293T细胞后制备浓缩慢病毒滴度为2.4×108 TU/μL；ZnT8 scfv-CAR慢病毒转染Tregs后GFP表达率为43.2% ± 4.1%；体外培养14 d后ZnT8特异性Tregs增殖（634.3 ± 92.5）倍，且高表达Foxp3（60.4% ± 3.5%）和Helios（64.3% ± 4.8%）。结论：成功构建了包含CAR结构的PLVX-EGFP-ZnT8 scfv慢病毒载体并包被ZnT8 scfv-CAR慢病毒；慢病毒转染后的CAR-Tregs体外扩增14 d仍能够维持ZnT8-CAR结构表达；CAR-Tregs为一群CD4+CD25+细胞且高表达Foxp3和Helios。

来源：2020年第7期

《南京医科大学学报(自然科学版)》期刊编辑部

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