南京医科大学学报(自然科学版)

作者：杨彩霞，陆 超

单位：南京医科大学第一附属医院儿科，江苏 南京 210029,,南京医科大学第一附属医院儿科，江苏 南京 210029,

关键词：急性T细胞淋巴细胞白血病;凋亡;染色质解旋酶DNA结合蛋白4（CHD4）;启动子;转录因子

基金：国家自然科学基金（81770162）

目的：探讨人染色质解旋酶DNA结合蛋白4（recombinant chromodomain helicase DNA binding protein 4，CHD4）基因表达对急性T细胞淋巴细胞白血病细胞增殖和凋亡的影响及其启动子鉴定。方法：使用siRNA-CHD4瞬时转染T淋巴细胞白血病细胞（Jurkat）敲低CHD4基因表达，实时荧光定量qRT-PCR和Western blot检测细胞转染后CHD4表达量，流式细胞术测定细胞凋亡率及细胞周期变化；CCK-8分析测定CHD4基因对Jurkat细胞增殖的影响。根据生物信息学分析，以Jurkat细胞提取的全基因组DNA为模板，PCR扩增CHD4基因候选启动子区2 091 bp片段，以pGL3-Basic为载体，克隆含有CHD4基因候选启动子区的序列，制备重组质粒，并且构建一系列含CHD4基因候选启动子5′侧翼区截短序列质粒。将含CHD4启动子序列的质粒及截短序列质粒转染至Jurkat细胞和人胚胎肾T细胞（HEK293T），双荧光素酶报告基因检测各片段的启动子活性，确定CHD4基因启动子最小活性区域，并通过生物信息学方法分析该区域转录因子结合位点，构建结合位点突变的质粒，通过双荧光素酶报告基因检测，分析结合位点对CHD4 转录的影响。结果：流式细胞检测结果发现，与对照组比较，CHD4抑制Jurkat细胞凋亡，转染siRNA-CHD4的Jurkat细胞G0/G1期比例显著升高，而S期比例下降（P＜0.01）；CCK-8检测CHD4基因对Jurkat细胞的增殖有促进作用（P＜0.05）；成功构建含有CHD4基因候选启动子序列的质粒及其截短序列质粒，与pGL3-Basic空载体相比，含有CHD4基因候选启动子序列的质粒活性明显增加（P＜0.05）。CHD4基因最小活性区域位于转录起始位点-233~-13 bp，其中包含NF-κB、MZF1等转录因子结合位点；NF-κB 对CHD4启动子活性具有正向调控作用。结论：CHD4基因对Jurkat细胞凋亡有抑制作用，并且促进其增殖。CHD4最小活性区域位于转录起始位点-233~-13 bp，转录因子NF-κB 对CHD4基因启动子活性具有正向调控作用。

来源：2021年第3期

《南京医科大学学报(自然科学版)》期刊编辑部

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