南京医科大学学报(自然科学版)

作者：彭明玉，何庆玲，王文博，赵 聃，张 婧，王迎伟，邱 文

单位：南京医科大学免疫学系，江苏 南京 211166,,南京医科大学免疫学系，江苏 南京 211166,,南京医科大学免疫学系，江苏 南京 211166,,南京医科大学免疫学系，江苏 南京 211166,,南京医科大学免疫学系，江苏 南京 211166,,南京医科大学免疫学系，江苏 南京 211166,,南京医科大学免疫学系，江苏 南京 211166,

关键词：性别决定区Y框蛋白7;S100钙结合蛋白A8;启动子;结合元件

基金：国家自然科学基金（31470853，31770934，81971468）

目的：构建大鼠S100钙结合蛋白A8（S100A8）基因启动子荧光素酶报告质粒，并在HEK-293T中检查过表达性别决定区Y框蛋白7（SOX7）基因对S100A8启动子活性的影响，同时筛选可能的SOX7结合元件。方法：采用PCR技术扩增大鼠S100A8启动子全长，经双酶切后连接到pGL3-basic中，命名为pGL3-S100A8-FL。将pGL3-S100A8-FL与前期构建的pIRES2-SOX7质粒共转染HEK-293T，再测定荧光素酶活性。此外，运用JASPAR预测S100A8启动子区可能包含的SOX7结合元件，并依此构建4个启动子截短质粒（即pGL3-S100A8-1~4）。将pGL3-S100A8-FL和pGL3-S100A8-1~4分别与pIRES2-SOX7共转染HEK-293T，检查荧光素酶活性。接着构建SOX7结合元件突变的S100A8启动子质粒（即pGL3-S100A8-M），与pIRES2-SOX7转染HEK-293T，检测其荧光素酶活性。结果：将pGL3-S100A8-FL与pIRES2-SOX7共转染HEK-293T，发现过表达SOX7可显著增加pGL3-S100A8-FL启动子活性。将pGL3-S100A8-FL和pGL3-S100A8-1~4分别与pIRES2-SOX7共转染HEK-293T，发现pGL3-S100A8-4启动子活性显著低于pGL3-S100A8-FL和pGL3-S100A8-1~3，提示SOX7与S100A8启动子结合元件可能位于-200~+51 nt区域内。将-86~-57 nt元件突变质粒（pGL3-S100A8-M）或pGL3-S100A8-FL与pIRES2-SOX7共转HEK-293T，发现pGL3-S100A8-M启动子活性显著低于pGL3-S100A8-FL。提示SOX7可能与S100A8启动子-86~-57 nt元件结合。结论：成功构建大鼠S100A8基因启动子全长、截短和突变荧光素酶报告质粒，并初步确定S100A8启动子区的SOX7结合元件。

来源：2021年第5期

《南京医科大学学报(自然科学版)》期刊编辑部

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