南京医科大学学报(自然科学版)

作者：朱浩然，张 鑫，祁俊侠，闫丽红，赖娅娜，李聚学

单位：南京医科大学生物化学与分子生物学系，江苏 南京 211166,,南京医科大学生物化学与分子生物学系，江苏 南京 211166,,南京医科大学生物化学与分子生物学系，江苏 南京 211166,,南京医科大学生物化学与分子生物学系，江苏 南京 211166,,南京医科大学医药实验动物中心，江苏 南京 211166,,南京医科大学生物化学与分子生物学系，江苏 南京 211166,

关键词：CRISPR/Cas9;NUDT3;肥胖;基因敲除

基金：国家自然科学基金（82070872，92049118）

目的：利用CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术构建Nudix水解酶家族成员核苷二磷酸连接的部分X基序3［Nudix（nucleotide diphosphate linked moiety X）-type motif 3，Nudt3］基因敲除C57BL/6小鼠模型。方法：根据CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术，在Nudt3基因第2个外显子位置及第2个外显子与第3个外显子间的区域分别设计2个引导RNA（guide RNA，gRNA），结合早期胚胎显微注射技术构建生殖系基因编辑嵌合体小鼠，并从中筛选出合适的基因敲除小鼠。在此基础上，采用反转录PCR（reverse transcription PCR，RT-PCR）和蛋白质免疫印迹（Western blot）技术验证Nudt3基因在mRNA和蛋白水平的表达。结果：以较高效率获得了F0代基因编辑小鼠，通过繁育获得了F1代杂合子小鼠和F2代纯合子小鼠。RT-PCR和Western blot检测结果显示，F2代纯合子小鼠的若干代谢调控组织（如肝脏、下丘脑等）中均无Nudt3基因表达。结论：Nudt3基因敲除小鼠构建成功，为下一步的代谢表型鉴定以及机制研究提供了理想的动物模型。

来源：2021年第7期

《南京医科大学学报(自然科学版)》期刊编辑部

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