南京医科大学学报(自然科学版)

作者：匡 衡，蔡 欣，杨 展，周东明，周婷婷，汪茂荣，朱 进

单位：东部战区总医院秦淮医疗区肝病科教研室，安徽医科大学八一临床学院，江苏 南京 210001,,东部战区总医院秦淮医疗区肝病科教研室，安徽医科大学八一临床学院，江苏 南京 210001,,东部战区疾病预防控制中心，江苏 南京 210002,,东部战区疾病预防控制中心，江苏 南京 210002,,东部战区疾病预防控制中心，江苏 南京 210002,,东部战区总医院秦淮医疗区肝病科教研室，安徽医科大学八一临床学院，江苏 南京 210001,,东部战区疾病预防控制中心，江苏 南京 210002,

关键词：鼠疫耶尔森菌;嵌合抗体;F1抗原;亲和力;质谱分析

基金：国家生物安全专项（2018YFC1200603）；江苏省社会发展项目（BE2018617）

目的：建立抗鼠疫F1嵌合抗体的稳定表达细胞系，表达并纯化嵌合抗鼠疫F1抗体并鉴定其活性。方法：提取鼠源杂交瘤细胞株4C6总核糖核酸（ribonucleic acid，RNA），逆转录为互补脱氧核糖核酸（complementary DNA，cDNA），通过聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）获得抗F1抗体轻链、重链可变区基因，全基因合成嵌合抗体的重链和轻链基因，并克隆于真核表达载体pMH3质粒中，共转染入中国仓鼠卵巢上皮细胞-S（Chinese hamster ovary cell-S，CHO-S）中，经遗传霉素（geneticin，G418）筛选得到稳定表达F1嵌合抗体的细胞株，悬浮培养后收集上清并亲和纯化。采用酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）方法检测其与F1抗原的特异性结合能力；通过竞争性ELISA比较嵌合抗体和鼠源亲本抗体与抗原的结合能力，同时测定抗体亲和力和质谱分析抗体特性。结果：成功获得稳定分泌抗鼠疫抗原F1 嵌合抗体的稳定表达细胞系，该抗体能够特异性结合F1抗原，抗体的亲和力为2.303×10-9 mol/L。结论：成功制备了抗体鼠疫F1的嵌合抗体，为后续动物体内实验及临床药物研发奠定了基础。

来源：2021年第12期

《南京医科大学学报(自然科学版)》期刊编辑部

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