南京医科大学学报(自然科学版)

作者：李美双，赵丽华，李荣凤

单位：南京医科大学生殖医学国家重点实验室,,江苏省异种移植重点实验室,江苏 南京 211166,,南京医科大学生殖医学国家重点实验室 ；江苏省异种移植重点实验室,江苏 南京 211166,

关键词：猪;Sall1;蛋白结构;CRISPR/Cas9;猪胎儿成纤维细胞

基金：国家自然科学基金(31971379)

目的：从巴马小型猪SALL1的蛋白结构出发，分析其与人SALL1蛋白的同源性，进一步制备Sall1基因敲除的巴马小型猪胎儿成纤维细胞系，为通过体细胞核移植技术获得猪肾脏发育缺陷模型提供实验材料。方法：利用生物信息学方法分析人、猪、鼠 SALL1 的蛋白结构。利用在线设计软件，在猪 Sall1 基因第 1 外显子区域设计单链引导 RNA(single guide RNA， sgRNA)并将其连接至PX330质粒，构建猪Sall1基因敲除打靶载体。在初步转染细胞的基础上，通过Sall1基因测序分析验证 PX330⁃sgRNA载体打靶效率，最后将打靶载体转染至原代猪胎儿成纤维细胞(porcine fetal fibroblast，PFF)中，通过药物筛选获得单克隆细胞并鉴定其基因型。结果：生物信息学分析表明，相比小鼠，猪的SALL1蛋白与人SALL1蛋白具有更高的同源性。成功构建猪Sall1基因敲除打靶载体，并获得33个单克隆细胞系，经基因测序鉴定得到16个Sall1双等位基因敲除的细胞系。结论：生物信息学方法验证了人和猪SALL1蛋白具有更高的同源性。利用CRISPR/Cas9基因编辑技术获得Sall1基因敲除细胞系，为研究Sall1基因在猪肾脏发育过程中的作用提供研究材料，并为下一步获得猪肾脏缺失模型奠定基础。

来源：2022年第7期

《南京医科大学学报(自然科学版)》期刊编辑部

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