南京医科大学学报(自然科学版)

作者：邝振展，肖斌，孙朝晖，罗镕，何洁雯，李林海

单位：中国人民解放军南部战区总医院检验科,广东 广州 510010,,广州医科大学附属第六医院(清远市人民医院)检验医学部,广东 清远 511518,,中国人民解放军南部战区总医院检验科,广东 广州 510010,,广州医科大学金域检验学院,广东 广州 510180,,广州南方学院云康医学与健康学院,广东 广州 510970,,广州医科大学附属第六医院(清远市人民医院)检验医学部,广东 清远 511518,

关键词：CRISPR/Cas13a;TP53 R248W;crRNA;快速检测

基金：全军保健专项科研课题(18BJZ4)；广东省医学科学技术研究基金项目(B2019139)；全军卫勤保障能力创新与生成项目(20WQO29)；后勤科研开放项目(BLB19J009)

目的：建立一种基于 CRISPR/Cas13a 的 TP53 R248W 变异体的快速检测技术。方法：根据 Over⁃lap PCR 技术，以 TP53野生型质粒为模板构建TP53 R248W变异体质粒；对TP53R248W变异体扩增产物大小，扩增反应条件及crRNA长度和浓度进行优化，初步建立基于CRISPR/Cas13a的R248W变异体快速检测方法；利用不同突变率TP53 R248W变异体及模拟血浆 ctDNA，评价 CRISPR/Cas13a 方法的检测灵敏度。结果：建立的 CRISPR/Cas13a 方法成功检测出产物大小为 368 bp 的 TP53 R248W片段；在0.05~0.25 μmol/L浓度范围内，crRNA浓度越高，检测结果相对荧光值越高；该方法检测TP53 R248W变异体的灵敏度为1×104 拷贝/μL，最低可以检测出突变率为0.01%的变异体。结论：建立的CRISPR/Cas13a方法具有快速、简便、灵敏、 特异等优点，为组织和血浆中的TP53 R248W变异体的检测提供了新的技术手段。

来源：2022年第8期

《南京医科大学学报(自然科学版)》期刊编辑部

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