南京医科大学学报(自然科学版)

作者：彭鹏，解翠薇，王军，肖杭

单位：南京卫生高等职业技术学校临床一教研室,江苏 南京 210038,,南京医科大学公共卫生学院毒理学教研室,江苏 南京 211166,,南京医科大学公共卫生学院毒理学教研室,江苏 南京 211166,,南京医科大学公共卫生学院毒理学教研室,江苏 南京 211166,

关键词：原代神经元;蛋白组学;神经突触;神经损伤

基金：江苏省自然科学基金(BK20191349)

目的：探讨甲基苯丙胺(methamphetamine，METH)暴露后原代神经元蛋白组学及其对细胞功能的影响，整体阐述 METH的神经毒性及其影响通路。方法：将原代培养的神经元经METH(0、900 μmol/L)处理，蛋白酶解后，利用液相色谱⁃串联质谱(LC⁃MS/MS)对其进行检测，利用Uniprot_RattusNorvegicus_36080_20180123数据库对其进行鉴定，利用基因本体论(gene ontology，GO)分析进行蛋白功能注释，采用京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG)数据库分析将目标蛋白序列进行归类，获取目标蛋白参与的信号通路；基于上述通路，利用Western blot验证METH引起的神经元突触数量及表达改变；通过免疫荧光法观察突触间的表达及空间定位。结果：共鉴定出蛋白总数为 6 619个。与对照组比较， 表达差异(上调/下调)倍数大于1.2倍，且P ＜ 0.05的蛋白质归为差异蛋白，通过筛选，METH处理组与对照组的差异蛋白有51种， 其中上调的蛋白40种，下调的蛋白11种。蛋白表达方面，METH暴露显著降低突触后标志物PSD95及棘突标志蛋白Drebrin 的表达，而突触前标志物Synapsin1明显上调；免疫荧光结果显示，Drebrin表达明显下调且与F⁃actin的共定位减少，而PSD95与 Synapsin 1的空间定位亦显著下降。结论：METH暴露可引起原代神经元多种蛋白表达异常，细胞功能发生紊乱，突触结构破坏，引发神经元损伤。

来源：2022年第8期

《南京医科大学学报(自然科学版)》期刊编辑部

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