南京医科大学学报(自然科学版)

作者：庄一波，杨勇，宁晶晶

单位：常州市第一人民医院儿科,江苏 常州 213004,,常州市第一人民医院儿科,江苏 常州 213004,,常州市第一人民医院儿科,江苏 常州 213004,

关键词：足细胞;糖尿病肾脏病;血小板反应蛋白⁃4;细胞凋亡;炎症反应

基金：常州市卫生健康青苗人才培养工程项目(CZQM2020056)

目的：探讨血小板反应蛋白4(thrombospondin⁃4，TSP⁃4)对高糖(high glucose，HG)刺激足细胞增殖、凋亡、氧化应激及炎症反应的潜在影响，揭示TSP⁃4在糖尿病肾脏病(diabetic kidney disease，DKD)发生发展中的作用。方法：①通过实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测HG诱导的足细胞中TSP⁃4和信号转导因子和转录激活因子3(signal transducer and ac⁃ tivator of transcription3，STAT3)的表达水平；②在HG诱导的足细胞中干扰TSP⁃4后，通过细胞计数试剂盒(cell counting kit⁃8， CCK⁃8)和5⁃乙炔基⁃2′脱氧尿嘧啶核苷(5⁃ethynyl⁃2’⁃deoxyuridine，EdU)测定增殖能力；通过流式细胞术测定足细胞的凋亡和细胞周期分布；使用试剂盒检测活性氧(reactive oxygen species，ROS)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)、超氧化物歧化酶(super⁃ oxide dismutase，SOD)和过氧化氢酶(catalase，CAT)的相对含量。此外，通过酶联免疫吸附法检测炎症因子白细胞介素(inter⁃ leukin，IL)⁃1β、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor，TNF)⁃α和IL⁃6的表达水平；③应用染色质免疫共沉淀(chromatin immuno⁃ precipitation，ChIP)验证转录因子STAT3与TSP⁃4 的启动子区域的关系，并通过双荧光素酶报告基因检测进一步验证。结果： ①TSP⁃4和p⁃STAT3在HG诱导的足细胞中呈时间依赖性上调(P ＜ 0.05)；②干扰TSP⁃4可以逆转HG诱导的足细胞凋亡、氧化应激、炎症反应和受抑制的增殖(P ＜ 0.05)；③STAT3可以结合TSP⁃4的启动子区域，从而诱导转录，对TSP⁃4启动子活性具有正向调控作用。结论：干扰 TSP⁃4 可减轻 HG 诱导的足细胞凋亡、氧化应激和炎症反应，对足细胞具有保护作用；转录因子 STAT3对TSP⁃4基因启动子活性具有正向调控作用。

来源：2022年第8期

《南京医科大学学报(自然科学版)》期刊编辑部

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