南京医科大学学报(自然科学版)

作者：马廷政，曹平平，汪徐春，孙玉洁

单位：南京医科大学基础医学院细胞生物学系 ；江苏省人类功能基因组学重点实验室,江苏 南京 211166,,南京医科大学基础医学院细胞生物学系 ；江苏省人类功能基因组学重点实验室,江苏 南京 211166,,南京医科大学基础医学院细胞生物学系 ；江苏省人类功能基因组学重点实验室,江苏 南京 211166,,南京医科大学基础医学院细胞生物学系 ；江苏省人类功能基因组学重点实验室,江苏 南京 211166,

关键词：荧光共振能量转移;蛋白质相互作用;膜受体;配体

基金：国家自然科学基金项目(82072580)

目的：以LRP6膜受体与WNT3A相互作用为模型，针对FRET技术在研究膜受体与胞外配体相互作用中的限制因素，探究有效的改进策略。方法：利用PDB与Zdock数据库建立LRP6与WNT3A的相互作用模型，在不影响LRP6膜受体与 WNT3A相互作用的前提下对LRP6进行一定的截短；将LRP6与WNT3A的信号肽重构在荧光标签的氨基末端，以避免信号肽切除导致的荧光标签丢失；使用柔性连接肽衔接信号肽、荧光标签及成熟蛋白，以削弱荧光标签对膜受体的亚细胞定位及功能的影响。结果：改进策略显著增强LRP6融合蛋白的膜定位信号，LRP6与WNT3A在细胞膜区域的相互作用能够用FRET技术进行清晰检测，平均FRET效率达到26.51%。结论：改进策略有效，为利用FRET技术研究活细胞中膜受体与胞外配体相互作用提供了新的思路和策略。

来源：2022年第8期

《南京医科大学学报(自然科学版)》期刊编辑部

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