南京医科大学学报(自然科学版)

作者：胡昊扬，许志强

单位：南通大学医学院,江苏 南通 226019,,南京医科大学第一附属医院药学部,江苏 南京 210029,

关键词：白细胞介素3;肥大细胞;大肠杆菌;原核表达

目的：对小鼠白细胞介素3(interleukin-3，IL-3)进行原核表达条件筛选和优化，为体外肥大细胞模型的高效率构建奠定物质基础。方法：根据小鼠IL-3的核苷酸序列进行大肠杆菌偏爱密码子优化并构建至pET-28a(+)质粒中，随后转化至大肠杆菌BL21(DE3)并筛选小鼠IL-3在该体系下表达的最佳条件，结合镍亲和层析和离子交换层析对其进行纯化，验证其促进小鼠骨髓细胞分化为肥大细胞的活性。结果：成功构建pET-28a(+)-IL-3原核表达载体，诱导出在SDS-PAGE中显示约16 kDa 的蛋白条带，并通过四因素多水平参数筛选确定了最佳的诱导条件。最终纯化的小鼠IL-3与干细胞生长因子联合诱导小鼠骨髓细胞分化可成功获得表面FcεRI和CD117双阳性的肥大细胞，且具有β-己糖胺酶释放功能。结论：构建了小鼠IL-3的表达载体并筛选了最佳的原核表达条件，所纯化的小鼠IL-3能够成功用于过敏反应研究的体外肥大细胞模型构建。

来源：2023年第2期

《南京医科大学学报(自然科学版)》期刊编辑部

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