南京医科大学学报(自然科学版)

作者：李田元，王悦，艾紫荷，刘晨，俞婷婷，程雁，乐珅

单位：南京医科大学基础医学院医学遗传学系,江苏 南京 211166,,南京医科大学基础医学院医学遗传学系,江苏 南京 211166,,南京医科大学基础医学院医学遗传学系,江苏 南京 211166,,南京医科大学基础医学院医学遗传学系,江苏 南京 211166,,南京医科大学基础医学院医学遗传学系,江苏 南京 211166,,南京医科大学基础医学院医学遗传学系,江苏 南京 211166,,南京医科大学基础医学院医学遗传学系,江苏 南京 211166,

关键词：初级纤毛;固定;细胞免疫荧光

基金：国家自然科学基金(82173291，82172629)

目的：比较不同固定方法对动物细胞初级纤毛组分免疫荧光染色的影响，探究初级纤毛免疫荧光成像的优化策略。方法：选择4%多聚甲醛(paraformaldehyde，PFA)、甲醇(MeOH)、10%三氯乙酸(trichloroacetic acid，TCA)固定细胞，后续使用相同的透化、封闭、抗体孵育条件，最后比较相同拍摄参数下初级纤毛的成像效果。结果：PFA固定法可使纤毛轴丝蛋白和部分纤毛膜蛋白有更好的染色效果，MeOH固定法可以更清晰地展现纤毛底部定位的蛋白。相比前两种方法，TCA固定的细胞虽然纤毛轴丝的染色效果很差，但适用于部分纤毛膜蛋白和轴丝结合蛋白。除荧光强弱不同外，使用不同方法固定后染色得到的蛋白定位也有微小差异。结论：3种固定方法在初级纤毛免疫荧光实验中各有优劣，需要综合考虑实验目的以及目标蛋白的特点进行选择。

来源：2023年第3期

《南京医科大学学报(自然科学版)》期刊编辑部

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