南京医科大学学报(自然科学版)

作者：丁浩南，严佳，唐诗佳，章非敏

单位：南京医科大学口腔疾病研究江苏省重点实验室 ；南京医科大学附属口腔医院修复科,江苏 南京 210029,,南京医科大学口腔疾病研究江苏省重点实验室 ；南京医科大学附属口腔医院修复科,江苏 南京 210029,,南京医科大学口腔疾病研究江苏省重点实验室 ；南京医科大学附属口腔医院修复科,江苏 南京 210029,,南京医科大学口腔疾病研究江苏省重点实验室 ；南京医科大学附属口腔医院修复科,江苏 南京 210029,

关键词：佛手柑内酯;人牙髓间充质干细胞;成骨分化;骨组织工程

基金：国家重点研发计划(2021YFA1201302，2021YFA1201300)；江苏省高校优势学科建设工程资助项目(2018-87)

目的：探究佛手柑内酯(bergapten，BP)对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cell，hDPSC)成骨分化的影响。方法：流式鉴定hDPSC的表面特异性抗原；使用CCK-8法检测BP的生物毒性与生物安全性；将hDPSC随机分为对照组与BP组， BP组分别加入含7.5、15.0、30.0 μmol/L BP的完全培养基，对照组加入含等体积二甲基亚砜溶液(dimethyl sulfoxide，DMSO)的完全培养基，采用荧光显微镜观察各组细胞形态。使用BCIP/NBT碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)显色及ALP定量检测法检测BP对hDPSC早期成骨分化的影响；使用茜素红(alizarin red S，ARS)染色法及半定量分析法评估成骨分化晚期细胞外基质矿化程度；利用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time PCR，qRT-PCR)检测 BP 对于 Runt 相关转录因子 2 (Runt-related transcription factor 2，RUNX2)、骨钙素(osteocalcin，OCN)、骨桥蛋白(osteopontin，OPN)、ALP等成骨标志基因表达水平的影响；使用免疫印迹分析检测成骨分化蛋白指标的变化。结果：CCK-8实验结果表明7.5、15.0、30.0 μmol/L BP生物安全性较好(P ＜ 0.01)；与对照组相比，BP组细胞ALP染色更明显，15.0 μmol/L组ALP活性水平更高(P ＜ 0.01)；与对照组相比，BP 组细胞外基质矿化水平更高，15.0 μmol/L BP处理后结节最多最深；与对照组相比，BP组成骨相关基因和蛋白的表达均明显增多且15.0 μmol/L处理略优(P ＜ 0.01)。结论：一定浓度的BP具有良好的生物安全性，且能对hDPSC的成骨分化产生促进作用，15.0 μmol/L成骨诱导效果较优。

来源：2023年第3期

《南京医科大学学报(自然科学版)》期刊编辑部

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