南京医科大学学报(自然科学版)

作者：谢奇，樊鑫梅，韩永红，陶娟，刘旭，刘家秀

单位：江苏护理职业学院药学与中药学院,江苏 淮安 223005,,江苏护理职业学院药学与中药学院,江苏 淮安 223005,,江苏护理职业学院药学与中药学院,江苏 淮安 223005,,江苏护理职业学院药学与中药学院,江苏 淮安 223005,,江苏护理职业学院药学与中药学院,江苏 淮安 223005,,江苏护理职业学院药学与中药学院,江苏 淮安 223005,

关键词：黑色素瘤;长链非编码RNA核富集转录本1;microRNA-29c-3p;硫酸软骨素蛋白多糖4;增殖;迁移;侵袭

基金：淮安市自然科学研究计划(联合专项)项目(HABL202112)

目的：探讨长链非编码RNA-核富集转录本1（long non-coding RNA-nuclear enriched abundant transcript 1，lnc-NEAT1） 对黑色素瘤（melanoma，MM）细胞增殖、迁移和侵袭的调控机制。方法：体外培养MM细胞系（A375、A875、M14、B16）和人表皮黑色素细胞（HEMa-LP），采用实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR，RT-qPCR）检测细胞中lnc-NEAT1、microRNA- 29c-3p（miR-29c-3p）、硫酸软骨素蛋白多糖4（chondroitin sulfate proteoglycan 4，CSPG4）mRNA表达。取对数生长期B16细胞， 分为对照组（control组）、si-NC组、si-NEAT1组、si-NEAT1+inhibitor-NC组、si-NEAT1+miR-29c-3p inhibitor组，用Lipofectamine 3000将相应质粒转染到细胞中。RT-qPCR检测转染效率，MTT法检测细胞增殖活力，Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力，蛋白质印迹法检测细胞CSPG4及增殖、迁移与侵袭相关蛋白表达。双荧光素酶报告基因检测miR-29c-3p与lnc-NEAT1、 CSPG4 的靶向关系。裸鼠移植瘤实验探究 lnc-NEAT1 敲低对 MM 细胞体内生长的影响。结果：MM 细胞系中 lnc-NEAT1 和 CSPG4 mRNA水平显著高于HEMa-LP细胞，miR-29c-3p水平显著低于HEMa-LP细胞（P均 < 0.05）。敲低lnc-NEAT1可显著升高miR-29c-3p表达，降低CSPG4 mRNA和蛋白水平，抑制细胞增殖、迁移和侵袭，并降低Ki-67、N-cadherin与Vimentin蛋白水平，升高E-cadherin蛋白水平（P均 < 0.05）；下调miR-29c-3p表达可显著升高CSPG4 mRNA和蛋白水平，减弱lnc-NEAT1敲低对MM细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用（P < 0.05）。双荧光素酶报告基因检测结果显示，转染miR-29c-3p mimic后，细胞中 NEAT1-WT和CSPG4-WT的荧光素酶活性显著降低（P < 0.05）。裸鼠移植瘤实验结果显示，敲低lnc-NEAT1可显著抑制体内移植瘤生长，而抑制miR-29c-3p可显著减弱lnc-NEAT1敲低对移植瘤生长的抑制作用（P均 < 0.05）。结论：lnc-NEAT1可能通过调节miR-29c-3p/CSPG4轴促进MM细胞增殖、迁移和侵袭。

来源：2023年第4期

《南京医科大学学报(自然科学版)》期刊编辑部

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