南京医科大学学报(自然科学版)

作者：李玉，应帅，葛文，阮玉婷，吴宁霞，王伟民，张婧，邱文，王迎伟

单位：南京医科大学基础医学院免疫学系,江苏 南京 211166,,南京医科大学基础医学院免疫学系,江苏 南京 211166,,南京医科大学基础医学院免疫学系,江苏 南京 211166,,南京医科大学基础医学院免疫学系,江苏 南京 211166,,南京医科大学基础医学院免疫学系,江苏 南京 211166,,南京医科大学基础医学院免疫学系,江苏 南京 211166,,南京医科大学基础医学院免疫学系,江苏 南京 211166,,南京医科大学基础医学院免疫学系,江苏 南京 211166,,南京医科大学基础医学院免疫学系,江苏 南京 211166,

关键词：肿瘤坏死因子受体相关因子6;Krüppel样因子5;K63连接的多聚泛素化修饰;HEK 293T细胞

基金：国家自然科学基金(81971468，82171740)

目的：研究人胚肾 293T(HEK 293T，简称 293T)细胞中外源性肿瘤坏死因子受体相关因子(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6，TRAF6)与Krüppel样因子5(Krüppel-like factor 5，KLF5)的结合及TRAF6多聚泛素化修饰KLF5的方式和修饰的位点。方法：将构建的Flag-TRAF6、HA-KLF5、泛素过表达质粒、shTRAF6小干扰质粒和TRAF6 C70A位点突变质粒行不同组合转染293T细胞48 h。用免疫沉淀(immunoprecipitation，IP)和免疫印迹(immunoblotting，IB)实验检查TRAF6与 KLF5 的结合以及 KLF5 K63 或 K48 多聚泛素化水平。此外，构建 KLF5 全部赖氨酸突变的质粒，分别与 TRAF6 质粒共转染 293T 细胞。用前述 IP/IB 检测 KLF5 K63 连接的多聚泛素化修饰，并确定 KLF5 K63 泛素化修饰的位点。结果：293T 细胞中 TRAF6能与KLF5结合；TRAF6过表达和基因沉默或TRA6酶活性缺失能相应上调或下调KLF5 K63的多聚泛素化；KLF5 被 TRAF6 K63多聚泛素化修饰的位点是其第99位和第100位的赖氨酸。结论：TRAF6能与KLF5相互作用，并对KLF5-K99和 K100进行K63多聚泛素化修饰。

来源：2023年第4期

《南京医科大学学报(自然科学版)》期刊编辑部

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