南京医科大学学报(自然科学版)

作者：张芙蓉，苟黎明，李妍，王泽勇，杨斐，吴菁，覃健，薛斌

单位：南京医科大学附属逸夫医院中心实验室,,南京医科大学附属逸夫医院中心实验室,,检验科,,骨科，江苏 南京 211166,,骨科，江苏 南京 211166,,南京医科大学附属逸夫医院中心实验室,,骨科，江苏 南京 211166,,南京医科大学附属逸夫医院中心实验室,

关键词：CRISPR/Cas9;Lcat;肝脏特异性;基因敲入

基金：国家自然科学基金（32271187，32071142）；江苏省青蓝工程（KY520R202025）；省部共建协同创新中心（JZ21449020210617）；南京市卫生科技发展专项资金项目（YKK21256）

目的：通过 CRISPR/Cas9 介导的基因编辑技术构建卵磷脂胆固醇脂酰转移酶（lecithin-cholesterol acyltransferase， LCAT）基因敲入C57BL/6小鼠并与肝脏特异性表达Cre的转基因小鼠配繁得到肝脏特异性敲入Lcat基因C57BL/6小鼠模型。 为Lcat基因在肝脏相关代谢疾病发生机制的研究提供动物模型。方法：利用CRISPR/Cas9技术构建Lcat基因敲入小鼠；利用肝脏特异性表达Cre的转基因小鼠与Lcat基因敲入小鼠交配得到肝脏特异性敲入Lcat基因小鼠；通过PCR法鉴定小鼠的基因型 ；利用实时荧光定量 PCR（real-time quantitative PCR，qPCR）和 Western blot 技术验证 Lcat 基因的 mRNA 水平和蛋白水平。 结果：PCR结果显示肝脏特异性敲入Lcat基因的小鼠模型构建成功；qPCR结果显示Lcat基因在肝脏中特异性高表达；WB结果显示，与对照组小鼠相比，LCAT蛋白在肝脏特异性敲入Lcat的小鼠肝脏中有明显更高的表达。结论：成功构建肝脏特异性敲入Lcat基因小鼠，为在动物水平探索Lcat基因在肝脏相关代谢疾病中的功能及相关发病机制提供研究平台。

来源：2023年第10期

《南京医科大学学报(自然科学版)》期刊编辑部

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