南京医科大学学报(自然科学版)

作者：余清，徐敏，史桂兰，曹慧玲，李岷，吴倩，赵苏瑛

单位：南京中医药大学附属医院检验科，江苏 南京 210029,,南京中医药大学附属医院检验科，江苏 南京 210029,,南京中医药大学附属医院检验科，江苏 南京 210029,,南京中医药大学附属医院检验科，江苏 南京 210029,,南京中医药大学附属医院检验科，江苏 南京 210029,,南京医科大学公共卫生学院，江苏 南京 211166,,南京中医药大学附属医院检验科，江苏 南京 210029,

关键词：碳青霉烯耐药;肺炎克雷伯菌;基因组;测序

基金：国家自然科学基金（82073630）；江苏省中医院“益中”项目（2019Y48）

目的：基于基因组学研究医院内碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌的耐药基因分布，毒力情况及同源性分析，深入阐明院内感染的分子机制，为多重耐药菌株临床治疗和预防提供实验室依据。方法：收集1株临床分离的碳青霉烯耐药的泛耐药肺炎克雷伯菌，经培养鉴定，测定对常用抗生素的最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration，MIC），多位点序列分型（multi- locus sequence typing，MLST）进行基因分型并行全基因组测序。根据基因测序结果，选择相关耐药基因在临床收集的另外50 株碳青霉烯耐药的肺炎克雷伯菌中进行扩增检测，验证其携带情况，对测序结果进行进一步的阐述。结果：药敏结果显示该菌对除粘菌素和替加环素外的抗生素全部耐药，测序结果显示该菌染色体基因序列全长5 468 925 bp，含有4个质粒（179 972 bp、141 377 bp、85 181 bp和20 247 bp），共有5 984个蛋白质编码基因，85个tRNA基因和25 个rRNA 操纵子。此外，该菌携带有大量参与编码多种抗生素的耐药基因。MLST结果显示，该菌基因型为ST11型，该菌大部分序列与之前在四川和杭州报道的菌株类似，最接近的是一株编号SCKP020029（NCBI Accession number：CP029384）的肺炎克雷伯菌。收集的另外50株碳青霉烯耐药的肺炎克雷伯菌确认均为产超广谱β内酰胺酶（extented-spectrum beta-bactamases，ESBLs），其中97％为ST11型。脉冲场凝胶电泳（pulsed field gel electrophoresis，PFGE）结果显示分属3个克隆。在这些菌株中，耐药基因检出率分别为KPC-2（98%）， SHV -11（98%），TEM -1（76%），CTX -M（76%），Oqxb1（66%），qnrS（70%），Int1（42%），sul1（82%），sul2（96%），iutA（88%）， iucABCD（10%）和rmpA2（100%）。结论：实验结果揭示了院内碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌的基因组学具有高度相似性，流行病学具有聚集性和散发性交叉的特点。抗生素耐药结果提示了细菌耐药中选择性抗生素耐药压力的作用效应，同时质粒耐药基因在细菌中的传播提示这些耐药菌在院内的传播以质粒传播为主，有效的院内感染监测、隔离和控制这类质粒的传播是减少这种细菌耐药感染必不可少的措施。

来源：2023年第12期

《南京医科大学学报(自然科学版)》期刊编辑部

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