南京医科大学学报(自然科学版)

作者：李梦圆，王宇萌，徐青清，关卓，卞成玥，江飞，张光东

单位：南京医科大学附属口腔医院综合诊疗科，江苏省口腔疾病研究重点实验室，口腔医学转化研究中心，江苏 南京 210029,,南京医科大学附属口腔医院综合诊疗科，江苏省口腔疾病研究重点实验室，口腔医学转化研究中心，江苏 南京 210029,,南京医科大学附属口腔医院综合诊疗科，江苏省口腔疾病研究重点实验室，口腔医学转化研究中心，江苏 南京 210029,,南京医科大学附属口腔医院综合诊疗科，江苏省口腔疾病研究重点实验室，口腔医学转化研究中心，江苏 南京 210029,,南京医科大学附属口腔医院综合诊疗科，江苏省口腔疾病研究重点实验室，口腔医学转化研究中心，江苏 南京 210029,,南京医科大学附属口腔医院综合诊疗科，江苏省口腔疾病研究重点实验室，口腔医学转化研究中心，江苏 南京 210029,,南京医科大学附属口腔医院综合诊疗科，江苏省口腔疾病研究重点实验室，口腔医学转化研究中心，江苏 南京 210029,

关键词：α7乙酰胆碱受体;牙/骨向分化;人牙髓干细胞;钙离子;脂多糖

基金：国家自然科学基金（82270955）；江苏省科教能力提升工程—江苏省研究型医院建设单位（YJXYYJSDW4）；江苏省医学创新中心（CXZX202227）

目的：探讨活化α7乙酰胆碱受体（alpha 7 nicotinic acetylcholine receptor，α7-nAChR）联合钙离子（calcium ion，Ca2+ ） 对LPS刺激的人牙髓干细胞（dental pulp stem cell，DPSC）牙/骨向分化的影响。方法：分离培养DPSC，流式细胞术对DPSC进行表面标志物表达鉴定。CCK-8检测α7-nAChR 激动剂PNU-282987和Ca2+ 对DPSC增殖的影响。通过碱性磷酸酶（alkaline phos- phatase，ALP）活性和染色筛选PNU-282987促进DPSC表达ALP活性的最佳浓度。用大肠杆菌脂多糖（lipopolysaccharide，LPS） 模拟炎性微环境刺激DPSC。采用免疫印迹分析（Western blot，WB）、实时定量聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chain reaction，RT-qPCR）和茜素红染色等方法检测牙/骨向分化的相关蛋白：Ⅰ型胶原（type Ⅰ collagen，COL-I）、牙本质涎磷蛋白（dentin sialoprotein，DSPP）、骨钙素（osteopontin，OPN）、ALP、核心转录因子-2（runt-related transcription factor 2，RUNX2）、成骨细胞特异性转录因子（osterix，OSX），相关基因（COL-I、DSPP、OPN、ALP、RUNX2、OSX）和矿化基质表达情况。Fura-2AM 用于检测细胞内Ca2+ 流动情况。结果：CCK-8 实验显示，PNU-282987 浓度低于 10 μmol/L 时对细胞增殖无抑制作用，且此浓度处理 LPS 刺激的 DPSC 后 ALP 活性增加最明显；Ca2+ 浓度低于 2 mmol/L 对细胞增殖无抑制作用；Western blot 和 RT-qPCR 实验显示，PNU-282987及Ca2+ 处理后的LPS刺激的DPSC牙/骨向分化相关蛋白（COL-I、DSPP、OPN、ALP、RUNX2、OSX）和相关基因（COL-I、DSPP、OPN、ALP、RUNX2、OSX）的表达及矿化基质形成均明显上调，二者联合后上调最显著（P < 0.001）。Fura-2 AM 钙离子探针结果显示DPSC细胞内Ca2+ 浓度增加。结论：10 μmol/L PNU-282987联合2 mmol/L Ca2+ 可以促进LPS刺激的DPSC 的牙/骨向分化能力。

来源：2024年第2期

《南京医科大学学报(自然科学版)》期刊编辑部

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