南京医科大学学报(自然科学版)

作者：刘玉，应帅，罗灿，李玉，荣灿，王迎伟，邱文

单位：江苏卫生健康职业学院临床医学院微生物与免疫学教研室，江苏 南京 211800,,南京医科大学基础医学院免疫学系，江苏 南京 211166,,南京医科大学基础医学院免疫学系，江苏 南京 211166,,南京医科大学基础医学院免疫学系，江苏 南京 211166,,江苏卫生健康职业学院临床医学院全科教研室，江苏 南京 211800,,南京医科大学基础医学院免疫学系，江苏 南京 211166,,南京医科大学基础医学院免疫学系，江苏 南京 211166,

关键词：Thy-1肾炎;亚溶解型C5b-9;肾小球系膜细胞;krüppel样因子5;白细胞介素-23

基金：国家自然科学基金（82171740）；江苏省高等学校基础科学（自然科学）研究项目资助（23KJD310001）

目的：研究亚溶解型C5b-9（sublytic C5b-9）上调转录因子Krüppel样因子5（Krüppel-like factor 5，KLF5）促进Thy-1肾炎 （Thy-1 nephritis，Thy-1N）大鼠肾小球系膜细胞（glomerular mesangial cell，GMC）产生炎症因子白细胞介素（interleukin，IL）-23的作用。方法：①建立大鼠Thy-1N模型和体外培养大鼠GMC，用Western blot（WB）检查Thy-1N大鼠肾组织和受sublytic C5b-9刺激的 GMC中KLF5和IL-23的表达。②分别将KLF5过表达质粒（pIRES2-KLF5）或KLF5小干扰质粒（shKLF5）转染GMC，通过实时荧光定量PCR和WB检测KLF5和IL-23的mRNA和蛋白水平。③将IL-23全长启动子荧光素酶报告基因质粒（pGL3-IL-23-FL）转染 GMC，再给予sublytic C5b-9刺激，或将pGL3-IL-23-FL与pIRES2-KLF5或shKLF5共转染GMC，用荧光素酶报告基因实验检测 IL-23启动子活性的变化。④将慢病毒（lentivirus，LV）包装的LV-shKLF5和LV-shCTR行肾动脉灌注术导入大鼠肾组织，经小动物脏器可见光三维成像和冰冻切片观察GFP表达，证实LV-shCTR在肾组织中富集效率。之后再复制大鼠Thy-1N，用WB检查肾组织中KLF5和IL-23的蛋白表达。结果：①Thy-1N大鼠的肾组织和sublytic C5b-9刺激的GMC中，KLF5和IL-23的表达均显著升高，且KLF5的表达高峰稍早于IL-23。②在GMC中过表达或敲低KLF5能分别引起IL-23表达的升高或降低。③Sublytic C5b-9刺激或KLF5过表达均可增加GMC中IL-23启动子的活性，但敲低KLF5后可明显下调由sublytic C5b-9刺激GMC诱导的 IL-23启动子活性。④敲低Thy-1N大鼠肾组织中KLF5的表达后，其肾组织中IL-23的表达水平明显降低。结论：大鼠Thy-1N 发病早期，sublytic C5b-9刺激GMC后可通过上调KLF5促进IL-23基因的转录与表达。

来源：2024年第9期

《南京医科大学学报(自然科学版)》期刊编辑部

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