南京医科大学学报(自然科学版)

作者：崔闯，孙思怡，秦梓一，沙颖，徐海，江飞，张光东

单位：1南京医科大学附属口腔医院综合诊疗科，2牙体牙髓病科，口腔疾病研究与防治国家级重点实验室培育建设点，江苏省口腔转化医学工程研究中心，江苏 南京 210029,,1南京医科大学附属口腔医院综合诊疗科，2牙体牙髓病科，口腔疾病研究与防治国家级重点实验室培育建设点，江苏省口腔转化医学工程研究中心，江苏 南京 210029,,1南京医科大学附属口腔医院综合诊疗科，2牙体牙髓病科，口腔疾病研究与防治国家级重点实验室培育建设点，江苏省口腔转化医学工程研究中心，江苏 南京 210029,,1南京医科大学附属口腔医院综合诊疗科，2牙体牙髓病科，口腔疾病研究与防治国家级重点实验室培育建设点，江苏省口腔转化医学工程研究中心，江苏 南京 210029,,,,1南京医科大学附属口腔医院综合诊疗科，2牙体牙髓病科，口腔疾病研究与防治国家级重点实验室培育建设点，江苏省口腔转化医学工程研究中心，江苏 南京 210029,,1南京医科大学附属口腔医院综合诊疗科，2牙体牙髓病科，口腔疾病研究与防治国家级重点实验室培育建设点，江苏省口腔转化医学工程研究中心，江苏 南京 210029,

关键词：黄芩苷;M1巨噬细胞;THP-1;成牙/骨分化;牙髓干细胞

基金：国家自然科学基金（82270955）；南京市卫生科技发展专项资金（YKK24293）

目的：通过验证黄芩苷（baicalin，BA）在炎症环境下的抗炎效果并探究其对人牙髓干细胞（human dental pulp stem cell，hDPSC）成牙/骨分化的影响，为牙髓炎的活髓保存治疗提供参考。方法：选取人早期炎症牙髓组织制作冰冻切片并进行苏木素-伊红（hematoxylin-eosin，HE）染色，免疫组化染色检测白细胞介素（interleukin，IL）-1β表达，免疫荧光染色检测IL-1β、诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）的表达。将人单核细胞白血病细胞系THP-1分化的巨噬细胞在脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）及干扰素-γ（interferon-γ，IFN-γ）的诱导下极化为M1亚群，再用50 μmol/L的BA处理后，利用免疫荧光、实时逆转录聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR）和Western blot分析iNOS、IL-1β及IL-8 的表达变化，利用Western blot检测LC3B、Beclin-1及P62的表达变化以观察巨噬细胞自噬，并在使用自噬抑制剂3-MA阻断自噬后检测IL-1β及IL-8的表达变化。随后，提取不同条件处理的巨噬细胞上清液制备条件培养液作用于hDPSC并进行矿化诱导，采用碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）染色、茜素红（alizarin red S，ARS）染色、RT-PCR 及 Western blot 分析 ALP、 牙本质涎磷蛋白（dentin sialophosphoprotein，DSPP）、Runt相关转录因子2（runt-related transcription factor 2，RUNX2）、骨桥蛋白 （osteopontin，OPN）及Ⅰ型胶原（typeⅠcollagen，COL-1）的表达，以观察炎症环境下BA 对hDPSC 成牙/成骨分化能力的影响。 结果：早期牙髓炎组织炎症区周围 IL-1β和 iNOS 的表达明显升高。LPS 和 IFN-γ诱导后，巨噬细胞由 M0 向 M1 极化，iNOS、 IL-1β及IL-8表达明显增加。当加入50 μmol/L BA共同孵育24 h后，巨噬细胞极化程度明显降低，IL-1β、IL-8的mRNA水平明显下降；同时，与M1组相比，加入BA后LC3B-Ⅱ、Beclin-1表达升高，P62表达被抑制；3-MA阻断自噬后，IL-1β及IL-8的mRNA 水平显著升高。M1巨噬细胞的上清液作用于hDPSC并进行矿化诱导7~21 d后，hDPSC的ALP活性降低，钙盐沉积减少，ALP、 DSPP、RUNX2、OPN及COL-1的表达减少。BA处理后的M1巨噬细胞上清液加入hDPSC后，ALP活性显著升高，钙盐沉积明显增多，ALP、DSPP、RUNX2、OPN及COL-1的表达明显增加。结论：在炎症微环境下，BA可能是通过激活细胞自噬抑制牙髓炎症反应，促进hDPSC的成牙/骨分化能力。

来源：2025年第6期

《南京医科大学学报(自然科学版)》期刊编辑部

查看南京医科大学学报(自然科学版)杂志2025年第6期