南京医科大学学报(自然科学版)

作者：刁庆飞，张昊，杨春白雪，樊建春，武雪亮，韩磊，路永刚

单位：1河北北方学院研究生院，河北 张家口 075000,,1河北北方学院研究生院，河北 张家口 075000,,1河北北方学院研究生院，河北 张家口 075000,,河北北方学院附属第一医院普通外科，3肿瘤研究所，河北 张家口 075000 ；河北省人民医院实验室，河北 石家庄 050000,,河北北方学院附属第一医院普通外科，3肿瘤研究所，河北 张家口 075000 ；河北省人民医院实验室，河北 石家庄 050000,,河北北方学院附属第一医院普通外科，3肿瘤研究所，河北 张家口 075000,,,

关键词：EZH2;FAK;F-actin;ROS;结直肠癌;增殖;侵袭;迁移

基金：河北省科技厅重点研发计划（22377786D）；河北省卫计委医学科学重点课题计划（20211330）

目的：探讨Zeste同源物增强子2（enhancer of Zeste homolog 2，EZH2）对黏着斑激酶（focal adhesion kinase，FAK）/丝状肌动蛋白（filamentous actin，F-actin）/活性氧（reactive oxygen species，ROS）通路的调节作用，分析其对结直肠癌（colorectal cancer，CRC）细胞增殖、侵袭和转移的影响。方法：选取河北北方学院附属第一医院行CRC手术切除的患者50例，收集癌组织和癌旁正常组织标本，应用免疫组化法检测EZH2的表达水平，结合临床资料，分析EZH2的表达与临床病理参数及预后生存之间的关系；建立皮下移植瘤CRC裸鼠模型，分为阴性对照（EZH2 NC）组、EZH2过表达（EZH2 mimic）组、EZH2 NC+细胞松弛素D组和EZH2 mimic+细胞松弛素D组，培育14 d后观察肿瘤生长情况。体外培养人CRC细胞系SW480、SW620细胞， 采用脂质体转染的方法，将 SW480/SW620 细胞分为 4 组：EZH2 NC 组、EZH2 mimic 组、EZH2 NC+细胞松弛素 D 组和 EZH2 mimic+细胞松弛素D组。通过Western blot实验检测各组细胞中FAK/F-actin/ROS通路相关蛋白的表达情况，应用免疫荧光染色观察F-actin表达和分布，采用划痕、Transwell、CCK-8实验检测细胞迁移、侵袭及细胞活力。ChIP-qPCR实验检测局部FAK、 NADPH 氧化酶 2（NADPH oxidase 2，NOX2）、NADPH氧化酶4（NADPH oxidaes 4，NOX4）在EZH2上的富集情况。结果：免疫组化检测结果显示，患者CRC组织较癌旁正常组织高表达EZH2（P ＜ 0.05）；EZH2的表达水平与肿瘤的淋巴结转移及远处转移事件密切相关（P 均＜ 0.05）；生存分析结果显示，低表达 EZH2 CRC 患者的 5 年总生存率显著高于 EZH2 高表达患者（P ＜ 0.05）。皮下移植瘤CRC裸鼠模型建立成功，EZH2 mimic组肿瘤体积明显大于EZH2 NC组（P ＜ 0.05），细胞松弛素D干预后， EZH2 NC+细胞松弛素D组和EZH2 mimic+细胞松弛素D组肿瘤体积分别较EZH2 NC组、EZH2 mimic组明显减小（P均 ＜ 0.05）， 但两组间差异无统计学意义（P ＞ 0.05）。EZH2 mimic 组EZH2、p-FAK、p-Paxillin、NOX2、NOX4和c-Jun 氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase，JNK）蛋白表达水平明显高于 EZH2 NC 组（P ＜ 0.05），而 RUNX 家族转录因子 3（RUNX family transcription factor 3，RUNX3）蛋白表达水平稍低于 EZH2 NC 组（P ＜ 0.05），且 F-actin 分布数量、迁移能力和细胞活力增加（P ＜ 0.05）。 EZH2、p-FAK和p-Paxillin蛋白表达水平较未干预组差异无统计学意义（P ＞ 0.05），NOX2、NOX4和p-JNK蛋白表达水平较未干预组则明显降低（P ＜ 0.05），RUNX3蛋白表达水平较未干预组明显增加（P ＜ 0.05），而干预的两组间差异无统计学意义（P ＞ 0.05）； 此外，细胞松弛素D干预后F-actin分布数量、迁移能力和细胞活力均显著降低，而干预的两组间差异无统计学意义（P ＞ 0.05）。 ChIP-qPCR实验结果显示，使用EZH2抗体后，FAK、NOX2、NOX4所富集的启动子含量均显著升高（P ＜ 0.05）。结论：EZH2可通过上调FAK/F-actin/ROS通路活性进而促进CRC细胞的增殖、侵袭和转移。

来源：2025年第8期

《南京医科大学学报(自然科学版)》期刊编辑部

查看南京医科大学学报(自然科学版)杂志2025年第8期